聚合酶链反应（PCR）是一个关键的分子生物学技术，其反应体系包含以下几个主要成分：
缓冲液：通常pH为7.2，含有Mg2+，如1.5mmol/L。选择适当的缓冲液如Tris-HCl（pH7.6）和KCl浓度，对反应结果影响较大。
模板DNA：经过预处理的单链或双链DNA/RNA，纯度要求高，高分子量DNA处理后效果更佳。
引物：设计成16-30bp长，与目标序列互补，避免内部结构和互补，退火温度需通过计算确定（Ta = Tm - 5℃）。
Taq DNA聚合酶：耐高温型，由Thermusaquatics分离，74-75℃最适温度，Mg2+浓度对酶活性至关重要。
反应条件包括：Mg2+浓度（1-10mmol/L），dNTPs浓度（40-200μmol/L），引物浓度（0.1-1μmol/L），以及酶用量（如2.5U/μl）。电泳分析常用琼脂糖凝胶进行产物检测。
PCR的关键在于温度循环，包括变性（90-95℃）、退火（根据引物调整）和延伸（70-75℃）阶段。通过调整这些参数，可以优化特异性、产量和扩增效率。底物抑制（0%）和低dNTP浓度有助于提高产物质量和扩增效率。
影响PCR特异性和结果的因素还包括模板质量、引物设计、缓冲液成分和浓度，以及反应循环次数等。在扩增后期，增速减缓可能由多种因素导致，需要根据具体情况进行细致调整，以优化PCR反应性能。
扩展资料
聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。该方法一改传统分子克隆技术的模式，不通过活细胞，操作简便，在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增10^7～10^8倍，大大提高了DNA的得率。已广泛应用到分子生物学研究的各个领域。
